Med cirka 30 procent av rösterna blir ANO största parti och dubbelt så stort som något av de andra partierna.
Det socialdemokratiska regeringspartiet CSSD, med premiärminister Bohuslav Sobotka, förlorade samtidigt två tredjedelar av sina röster och gjorde sitt sämsta val sedan Tjeckien bildades, rapporterar The Guardian.
ANO beskrivs som ett högerpopulistiskt missnöjesparti och ledaren Andrej Babiš har lovat att sänka skatterna och stoppa EU:s planer på att tvinga Tjeckien ta emot asylsökare från tredje världen.
Babiš, som är miljardär, har kallats "Tjeckiens Donald Trump" och har precis som den amerikanske presidenten lovat att styra landet mer som en affärsman.
Regeringsförhandlingar väntas pågå i flera veckor.
